Ann. For. Sci. 66 (2009) 211
DOI: 10.1051/forest/2008093

Effect of salt on ROS homeostasis, lipid peroxidation and antioxidant mechanisms in Pinus pinaster suspension cells

Herlânder Azevedo, Vítor Amorim-Silva and Rui M. Tavares

Departamento de Biologia, Universidade do Minho, Campus de Gualtar, 4710-057 Braga, Portugal

Received 20 February 2008; accepted 19 November 2008; published online 28 February 2009

Abstract
• In the Pinus genus, information on the effectiveness of oxidative defence mechanisms during exposure to salt is lacking. The effect of salt stress imposition on ROS homeostasis was investigated using maritime pine (Pinus pinaster Ait.) suspension cells as a model system.
• Cells were maintained in MS-based medium, exposed to salt (50, 100 and 150 mM NaCl) and analysed for biomass production, evidencing a decreasing growth capacity. Use of 100 mM NaCl imposed severe salt stress without affecting cell viability, being chosen for subsequent studies on the ROS homeostasis of salt shock-treated suspension cells.
• Increased total ROS levels were evident on the second day of salt exposure, but a superoxide ion transient burst was immediately noticeable. Additionally, lipid peroxide formation seemed to correlate with superoxide ion breakdown. In-gel superoxide dismutase activity evidenced a FeSOD homodimer with strongly increasing activity between hours 12–48 of salt stress imposition. Subsequently, P. pinaster Fe-Sod1 and csApx1 genes were isolated from a cDNA library and expression was shown to increase within 12–24 h.
• Results show that severe salt treatment generates oxidative stress in P. pinaster cells despite the induction of antioxidant systems, and suggest a putative involvement of ROS in salt stress signalling.

Résumé - Effet du stress salin sur l'homéostasie des formes réactives d'oxygène, la peroxydation des lipides et les mécanismes antioxydants dans des suspensions cellulaires de Pinus pinaster.
• Les informations sur les mécanismes de défense oxydative du pin en réponse à un stress salin sont rares. L'effet d'une exposition au sel sur l'homéostasie des formes réactives d'oxygène (FRO) a été étudié en utilisant une suspension cellulaire de pin maritime (Pinus pinaster Ait.) comme modèle.
• Les cellules cultivées dans un milieu MS modifié ont été exposées au sel (50, 100 et 150 mM NaCl) et l'analyse de la production de biomasse a révélé une réduction de leur croissance. Une concentration de 100 mM NaCl, stress sévère qui n'affecte cependant pas la viabilité cellulaire, a été choisie pour les études suivantes.
• L'augmentation des teneurs en FRO est évidente le jour suivant l'enrichissement du milieu en sels mais une production transitoire d'ions superoxyde est immédiatement constatée. De plus, l'apparition de produits issus de la peroxydation des lipides semble concomitante à la disparition des ions superoxyde. La mesure par tests in-gel de l'activité de la superoxyde dismutase supporte l'implication d'un homodimère de FeSOD dont l'activité augmente fortement au bout de 12 et jusqu'à 48 h d'exposition au sel. Les gènes Fe-Sod1 et csApx1, isolés d'une banque d'ADNc de P. pinaster, voient leur expression augmenter au bout de 12 h et jusqu'à 24 h de traitement.
• Les résultats montrent que de fortes concentrations de sels provoquent un stress oxydatif dans les cellules de P. pinaster malgré l'induction de réponses antioxydantes et suggèrent l'implication des ERO dans les voies de transduction du stress salin.

Key words: H₂O₂ / maritime pine / NaCl / superoxide

Mots clés : H₂O₂ / pin maritime / NaCl / superoxide

Corresponding author: hazevedo@bio.uminho.pt

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